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    公司小鼠白細(xì)胞介素12(IL-12)試劑盒供應(yīng)

    發(fā)布時(shí)間: 2015-01-15  點(diǎn)擊次數(shù): 1385次

    小鼠白細(xì)胞介素12(IL-12)試劑盒操作步驟
    1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支,用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
    2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、
    待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
    3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。
    4.配液:將 20倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20倍稀釋后備用
    5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復(fù) 5次,拍干。
    6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
    7.溫育:操作同 3。
    8.洗滌:操作同 5。
    9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻, 37℃避光顯色15分鐘.
    10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
    11.測(cè)定:以空白空調(diào)零, 450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度( OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
     8 ng/L 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

    4 ng/L 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    2 ng/L 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    1 ng/L 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    0.5 ng/L 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

    操作程序總結(jié):計(jì)算
    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo), OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),根據(jù)樣品的 OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
    小鼠白細(xì)胞介素12(IL-12)試劑盒注意事項(xiàng)
    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
    2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
    3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
    4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)( n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
    5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    6.底物請(qǐng)避光保存。
    7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn) .
    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
    9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
    10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

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